慢病毒(Lentivirus)包装
慢病毒是逆转录病毒的一种,是RNA病毒,可以有效地感染神经元细胞、肿瘤细胞、干细胞等多种类型细胞。此外,由于其可以整合至细胞基因组,也常用于稳定细胞株的筛选。
(1) 表达质粒(即表达目的基因并含有LTR序列的质粒,也称为穿梭质粒、transfer质粒、pLV质粒、载体质粒等)需由申请人自行提供,或由平台代为构建。
(2) 慢病毒载体交付形式为浓缩病毒或纯化的病毒。浓缩病毒产量较高,费用低,交付周期短,可满足大多数体外实验需求;纯化病毒采用蔗糖密度梯度离心法,产量较低,费用高,交付周期略长,适用于体内和体外实验。
(3) 病毒滴度默认免费通过RT-qPCR或RT-ddPCR测定病毒基因组拷贝数,滴度>1x109 vg/mL(对应感染性滴度>1x108 TU/mL,一般荧光对照病毒可达109 TU/mL)。实际滴度会受基因组大小、基因序列等影响。平台可测定感染性滴度:根据感染细胞荧光计数得到的感染性滴度单位为Transducing Units/mL (TU/mL);根据感染细胞中病毒基因组整合计数得到的感染性滴度单位为Integration Units/mL (IU/mL)。