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载体构建

根据实验需求，设计、构建包括基因过表达、敲降、编辑和荧光报告基因、荧光素酶基因等的病毒或非病毒表达的质粒载体。

腺相关病毒（AAV）包装

AAV是一种单链 DNA 病毒，因其非致病性、低免疫原性、不发生基因组整合、长期稳定表达等优势，是科研领域的重要体内基因递送工具，也是基因治疗中最常用的基因递送载体。同时，AAV丰富的血清型及其组织或细胞感染嗜性差异，为实现靶向性的基因递送提供了可能。（1）平台可包装AAV1、AAV2、AAV5、AAV7、AAV8、AAV9、AAV-rh10、AAV-retro、AAV2-PHP.B、AAV2-PHP.eB、AAV-PHP.S、AAV-B10、AAV-B22、AAV-ie、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV2.7m8等血清型病毒。如有其它血清型需求可与本平台沟通。（2）表达质粒（即表达目的基因并含有ITR序列的质粒，也称为穿梭质粒、transfer质粒、pAAV质粒、载体质粒等）需由申请人自行提供，或由平台代为构建。平台现有部分AAV表达质粒（见附表1），可共大家免费使用，或在其基础上构建自己的AAV表达质粒。（3） AAV滴度为通过qPCR或ddPCR测得的病毒基因组拷贝数，一般为2x1012-5x1013 viral genome/mL （vg/mL）。实际滴度会受AAV血清型、基因组大小、基因序列等影响（某些情况下滴度可能小于1x1012 vg/ mL）。表达基因（含两个ITR及其中间的所有序列）大于4.8 kb时，将可能严重影响病毒产量和基因表达水平，请严格控制表达基因的序列长度。（4）纯化方式：平台提供氯仿抽提法和碘克沙醇超速离心法两种纯化方式可供选择。氯仿纯化法纯化效果较超离法略差，可满足大多数体内外实验需求，病毒产量较高，费用较低（详见参考文献）；碘克沙醇超速离心法能减少空衣壳数量（不含DNA的AAV颗粒），但滴度略低，费用较高，交付周期略长。参考文献：[1] Negrini M, et al. AAV Production Everywhere: A Simple, Fast, and Reliable Protocol for In-house AAV Vector Production Based on Chloroform Extraction. Curr Protoc Neurosci. 2020;93(1):e103. [2] Davidsson M, et al. A comparison of AAV-vector production methods for gene therapy and preclinical assessment. Sci Rep. 2020;10(1):21532.

慢病毒（Lentivirus）包装

慢病毒是逆转录病毒的一种，是RNA病毒，可以有效地感染神经元细胞、肿瘤细胞、干细胞等多种类型细胞。此外，由于其可以整合至细胞基因组，也常用于稳定细胞株的筛选。（1）表达质粒（即表达目的基因并含有LTR序列的质粒，也称为穿梭质粒、transfer质粒、pLV质粒、载体质粒等）需由申请人自行提供，或由平台代为构建。（2）慢病毒载体交付形式为浓缩病毒或纯化的病毒。浓缩病毒产量较高，费用低，交付周期短，可满足大多数体外实验需求；纯化病毒采用蔗糖密度梯度离心法，产量较低，费用高，交付周期略长，适用于体内和体外实验。（3）病毒滴度默认免费通过RT-qPCR或RT-ddPCR测定病毒基因组拷贝数，滴度>1x109 vg/mL（对应感染性滴度>1x108 TU/mL，一般荧光对照病毒可达109 TU/mL）。实际滴度会受基因组大小、基因序列等影响。平台可测定感染性滴度：根据感染细胞荧光计数得到的感染性滴度单位为Transducing Units/mL （TU/mL）；根据感染细胞中病毒基因组整合计数得到的感染性滴度单位为Integration Units/mL （IU/mL）。

现货rAAV病毒载体

载体平台长期储备有多种常用重组AAV病毒（rAAV）载体预包装现货（AAV vectors in stock），以供各实验室科研人员随时取用。载体平台的rAAV病毒载体滴度为1×1012 vg/ml -5×1013 vg/ml，规格为20μl/支。现货病毒将的种类将持续跟新和增加，以满足更多实验需求。现货rAAV病毒载体流程申领流程：查询rAAV病毒载体现货列表>联系载体平台（Viral_Vector@cimrbj.ac.cn），确认载体库存并预约领取时间>领取病毒载体。请自备冰盒，按预约时间到载体平台实验室（科研南楼911/913室）领取病毒载体，并签字登记；如无法按预约时间准时领取，请提前告知。 *如所需病毒尚无预包装现货，请申请“按需包装rAAV载体 ”服务。

共享病毒包装质粒

为充分利用资源，平台鼓励各实验室共享 AAV、 LV 等病毒载体的表达质粒，平台将在病毒包装中给予一定费用抵扣。

其它病毒载体

载体平台目前可提供腺相关病毒（Adeno-associated virus， AAV）和慢病毒（Lentivirus， LV）的包装服务，后续还将开发并提供腺病毒（Adenovirus， AdV）、和逆转录病毒（Retrovirus， RV）、杆状病毒（Baculovirus）、狂犬病病毒（Rabies virus）、单纯疱疹病毒1型（HSV-1），水疱性口炎病毒（VSV）等新的病毒载体，助力广大科研人员实现突破。